歴史と背景

タンパク質分解は、生化学および細胞生物学でタンパク質構成を調べるために広く使用されています。「制限されたトリプシンタンパク質分解」では、少量のプロテアーゼが折りたたまれたタンパク質と折りたたまれていないタンパク質の両方を消化しますが、通常は似ていない速度で行われます。最近、タンパク質分解に基づくタンパク質安定性のいくつかの別のアッセイが提案され、折りたたまれていないタンパク質を切断するための高い特異性を持つ別のプロテアーゼを活用しています。これらには、パルスタンパク質分解、タンパク質分解走査熱量測定、および FASTpp が含まれます。

使い方

FASTpp は、さまざまな条件下での消化に抵抗するタンパク質の量を測定します。この目的のために、露出した疎水性残基を特別に切断する熱安定性プロテアーゼが使用されます。 FASTpp アッセイは、SDS-PAGEの分離力と展開画分についての熱安定性プロテアーゼの熱アンフォールディング、特異性を組み合わせます。この組み合わせにより、 FASTpp は、最大85°C、pH 6-9の温度、プロテオーム全体の有無など、物理化学的条件の広い範囲で折り畳まれた画分の変化に遭遇する可能性があります。アプリケーションの範囲は、バイオテクノロジーから点突然変異の研究やリガンド結合アッセイにまで及びます。

画像164A | ソリューション内のキャプチャ。| サラクサラ/ CC BY（https://creativecommons.org/licenses/by/3.0/legalcode）| Page URL ：（https://commons.wikimedia.org/wiki/File:In_solution_capture.png）from Wikimedia Commons

作者 : Yavor Mendel

参考文献：

分子生物学のテクニックI

分子生物学のテクニックIII