技術的方法論

ターゲット濃縮法により、シーケンス前に DNA サンプルから目的のゲノム領域を選択的にキャプチャできます。2005年の直接ゲノム選択（DGS）操作の最初の説明以来、いくつかのターゲット濃縮戦略が開発されてきました。

ターゲットを絞ったキャプチャーについては多くの手法が説明されていますが、エクソーム全体をキャプチャーするために拡張されているのはごく一部です。全エクソームシーケンスに適用される最初の客観的濃縮戦略は、2007年にアレイベースのハイブリッドキャプチャ操作でしたが、ソリューション内キャプチャが近年人気を博しています。

アレイベースのキャプチャ

マイクロアレイは、表面に固定された関心領域をタイル張りするために、ヒトゲノムからの配列を持つ一本鎖オリゴヌクレオチドを含みます。 Genomic DNA は剪断されて二本鎖フラグメントを形成します。フラグメントは、末端修復を受けて平滑末端を生成し、ユニバーサルプライミングシーケンスを持つアダプターが追加されます。これらのフラグメントは microarray でオリゴにハイブリダイズします。ハイブリダイズしていないフラグメントは洗い流され、目的のフラグメントが溶出します。次に、フラグメントは PCR を使用して増幅されます。

画像163A | Exome sequencing ワークフロー：パート2。サラクサラ/ CC BY（https://creativecommons.org/licenses/by/3.0/legalcode）| Page URL ：（https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Exome_Sequencing_workflow_1b.png）from Wikimedia Commons

作者 : Yavor Mendel

参考文献：

分子生物学のテクニックI

分子生物学のテクニックIII